病毒检测手段 经验丰富

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空斑形成试验：是一种检查和准确测定病毒滴度的方法。
1、将稀释的病毒悬液加入单层细胞培养瓶中。病毒吸附后,再覆盖-层融化的半固体营养琼脂,使病毒在单层细胞培养中有限扩散。
2、结果是每一个有感染性的病毒在单层细胞中可产生一个局限性的感染灶。用活性染料(如中性红)染色,则活细胞着色,受病毒感染而破坏的细胞不着色,形成肉眼可见的空斑/蚀斑(plaque)。
3、每个蚀斑是由一个感染毒颗粒形成的 ,称作空斑形成单位(plaque forming unit, PFU)。
4、病毒悬液中的感染毒量的滴度可用PFU / 表示。

病毒的分离与培养：主要有细胞培养法、鸡胚培养法、动物接种法等,而对细胞、鸡胚不敏感，又没有合适动物模型的病毒，可采用基因克隆的方法。
1、细胞培养法：二倍体细胞株来源于正常人胎儿组织,主要用于培养病毒制备疫苗等;原代细胞是指从机体取出后立即培养的细胞,原代细胞的培养是指直接从机体取下细胞、组织和后立即进行培养;传代细胞来源于细胞或细胞株传代过程中变异的细胞。
2、鸡胚培养：鸡胚培养法是用来培养某些对鸡胚敏感的动物病毒的一种培养方法,此方法可用以进行多种病毒的分离、培养,勒的滴定,中和试验以及抗原和疫苗的制备等。
3、动物接种：常用的实验动物有、乳鼠、、家兔猴和鸡等;常用的接种途径包括皮下、皮内、腹腔、静脉、角膜、鼻腔及脑内接种等方式。

病毒检测形态学检查及诊断：
1、光学显微镜：直接观察到较大的病毒体(如痘病毒)、包涵体狂犬病毒感染一一嗜酸性包涵体。
2、扫描电子显微镜：用于观察病毒和表面结构和附属结构等。
3、透射电子显微镜：用于观察病毒的大小、形态与结构及细胞内的**微结构等。

病毒增殖的观察：
病毒在细胞内增殖的指标：
1、细胞形态的改变；
2、红细胞吸附；
3、细胞培养液pH值改变；
病毒数量趿病毒感染性测定：
1、血凝试验；
2、中和试验；
3、空斑形成试验；
4、半数感染量(ID50)和组织培养半数感染量( TCID50 )。
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